【掌健识】糖化血红蛋白系列微课程6：糖化血红蛋白常用检测方法及特点

自上世纪70年代末第一台商品化自动检测糖化血红蛋白仪器问世以来，糖化血红蛋白检测技术有了较大发展，已经从最开始检测GHb、HbA1到现在的检测HbA1c，测定方法也发展至几十种之多。目前常用方法按其理化性质大致可分为两大类：第一类是基于糖化与非糖化成分所带电荷不同，如离子交换层析法，电泳法；第二类是基于糖化与非糖化的结构不同，如亲和层析法，免疫法等。

离子交换层析法目前比较普遍使用的主要有全自动离子交换高效液相色谱（HPLC）法，以A1C峰面积与A0峰面积百分比值来报告糖化血红蛋白。这类方法常见的干扰物有：糖化前体（Schiff碱），胎儿血红蛋白，衍生血红蛋白（甲酰化或乙酰化血红蛋白）及血红蛋白变异体等因素的干扰，结果容易产生偏差。随着技术不断发展，目前很多高效液相色谱法在一定程度上克服了不少影响因素，对HbA1c的分离达到临床要求的精密度和稳定性（CV<3%)。美国，瑞士，日本等国将其作为标准化参考系统的参考方法。

电泳法是利用糖化和非糖化血红蛋白在电场中所带电荷不同，等电点及泳动速度不同进行分离检测。但一般电泳法速度慢，设备和试剂成本相对较高。近年来临床应用的毛细管电泳法因分辨率高、精准度高、抗干扰能力强、检测HbA1c同时还能报告其他血红蛋白成分越来越受到关注。

亲和层析法的原理是硼酸盐具有与结合在血红蛋白分子上的葡萄糖的1，2-顺位二醇基发生可逆结合反应的性质。以经常使用的间-氨基苯硼酸琼脂糖为例：糖化血红蛋白与硼酸结合，而非糖化血红蛋白不结合，先通过；然后加入高浓度也包含顺位二醇基的多羟基复合物（如山梨醇），糖化血红蛋白与硼酸的结合被山梨醇替换，从而被洗脱下来。亲和层析法测定的是总糖化血红蛋白（并不局限血红蛋白β亚基氨基末端结合葡萄糖的成分），所以最终再通过换算，以相当于“HbA1c”来报告。虽然亲和层析法检测值不受血红蛋白变异体和衍生物的影响，但也无法给出提示样本中是否存在血红蛋白变异体等干扰物。

免疫法是以糖化血红蛋白β珠蛋白氨基未端4-8个氨基酸为抗原，利用抗原抗体反应原理进行测定，所以该方法可以特异性的识别HbA1c。但需要注意的是严重的黄疸和高脂血以及胎儿血红蛋白高的病人会使检测结果偏低。理论上此法不受变异血红蛋白影响，但现在研究发现变异血红蛋白可影响测定结果。同亲和层析法一样，该方法也同样无法给出提示样本中是否存在血红蛋白变异体等干扰物。

最后，我用一张图表进行总结，高效液相色谱法是目前临床主流技术，重复性好，自动化，通量高，可识别常见血红蛋白变异体，但易受氨基甲酰化影响。毛细管电泳法，分辨率高、精准度高、抗干扰能力强，但试剂设备成本高，需要成批量检测。亲和层析法，不受氨基甲酰化影响，但无法识别变异体，胎儿血红蛋白高的病人结果偏低。免疫法，也不受氨基甲酰化影响，但易受HbS、HbC变异体干扰及肝、肾功能的影响，测试精度差。

谢谢大家,那么期待大家下次再见。